elisa测抗原实验报告

时间:2025-01-23 10:35:40 银凤 报告 我要投稿
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elisa测抗原实验报告范文(通用7篇)

  在人们素养不断提高的今天,报告使用的次数愈发增长,报告具有双向沟通性的特点。一起来参考报告是怎么写的吧,下面是小编收集整理的elisa测抗原实验报告范文,欢迎大家借鉴与参考,希望对大家有所帮助。

elisa测抗原实验报告范文(通用7篇)

  elisa测抗原实验报告 1

  实验目的:利用 ELISA 技术检测样本中是否存在特定病毒抗原,以辅助疾病诊断。

  实验材料:待检样本、病毒抗原特异性抗体、酶标二抗、底物显色液、ELISA 试剂盒配套试剂与耗材。

  实验步骤:首先对 ELISA 板进行包被,将捕获抗体固定在板孔表面;然后加入待检样本,孵育使抗原与抗体结合;洗涤后加入酶标二抗,再次孵育并洗涤;最后加入底物显色液,根据颜色变化判断结果。

  实验结果:部分样本孔出现明显显色反应,通过与标准品对比,初步判断这些样本中存在目标病毒抗原。

  实验分析与结论:本次实验操作过程规范,但在样本处理环节可能存在个别样本交叉污染情况。结果表明 ELISA 技术能够有效检测出样本中的病毒抗原,为疾病诊断提供了有力依据,但需进一步优化实验流程以减少误差。

  elisa测抗原实验报告 2

  实验目的:运用 ELISA 方法检测食品中是否含有常见过敏原抗原,保障食品安全。

  实验材料:各类食品样本、过敏原特异性抗体、酶结合物、终止液等。

  实验步骤:依次进行包被、封闭、加样、孵育、洗涤、加酶标二抗、孵育洗涤、加底物显色及终止反应等步骤。

  实验结果:在几种坚果类食品样本中检测到了相应的.过敏原抗原,而其他食品样本未出现阳性反应。

  实验分析与结论:实验中严格控制了温度和时间等条件,但在洗涤步骤中可能存在洗涤不彻底的问题。结果说明 ELISA 可用于食品过敏原检测,对于预防食物过敏事件具有重要意义,后续需改进洗涤操作以提高检测准确性。

  elisa测抗原实验报告 3

  实验目的:采用 ELISA 技术检测植物组织样本中是否存在特定病原菌抗原,为植物病害防治提供依据。

  实验材料:患病植物组织提取液、病原菌特异性抗体、羊抗兔 IgG-HRP 等。

  实验步骤:ELISA 板包被抗体后,加入植物组织提取液,后续按常规 ELISA 流程进行操作。

  实验结果:在表现出明显病害症状的植物样本中检测到了病原菌抗原,健康植物样本为阴性。

  实验分析与结论:实验过程中样本提取可能存在杂质残留影响结果。ELISA 可用于快速检测植物病原菌抗原,对于及时发现和防治植物病害具有重要价值,后续实验需优化样本提取方法。

  elisa测抗原实验报告 4

  实验目的:利用 ELISA 检测动物血清样本中特定疫病抗原,辅助动物疫病诊断与防控。

  实验材料:动物血清、疫病抗原特异性抗体、TMB 底物溶液等。

  实验步骤:标准的 ELISA 操作流程,包括包被、加样、孵育、洗涤、加酶标抗体、显色等。

  实验结果:部分养殖场送检的动物血清样本呈现阳性反应,表明这些动物可能感染了目标疫病。

  实验分析与结论:实验中存在不同批次试剂可能导致的`误差。结果显示 ELISA 在动物疫病抗原检测方面具有良好的应用前景,但需对试剂质量进行更严格把控,以提高检测的可靠性。

  elisa测抗原实验报告 5

  实验目的:通过 ELISA 技术测定生物制品中目标抗原的'含量,确保产品质量。

  实验材料:生物制品样本、已知浓度的抗原标准品、抗该抗原的单克隆抗体等。

  实验步骤:先制作标准曲线,然后对生物制品样本进行稀释后加样,按照 ELISA 常规步骤操作。

  实验结果:根据标准曲线计算出生物制品样本中抗原的含量,与产品质量标准对比,判断是否符合要求。

  实验分析与结论:实验过程中样本稀释倍数的准确性对结果影响较大。结果表明 ELISA 可用于生物制品抗原含量测定,为产品质量控制提供了有效手段,后续需更精确地控制样本稀释过程。

  elisa测抗原实验报告 6

  一.实验目的

  酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA)是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原(抗体)吸附在固相载体上称为包被,加待测抗体(抗原), 再加相应酶标记抗体(抗原),生成抗原(抗体)--待测抗体(抗原)--酶标记抗体的复合物,再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体(抗原)的量。待测抗体(抗原)的定量与有色产生成正比。

  二.实验原理

  用于免疫酶技术的酶有很多,如过氧化物酶,碱性磷酸酯酶,β-D-半乳糖苷酶,葡萄糖氧化酶,碳酸酐酶,乙酰胆碱酯酶,6-磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶,碱性磷酸酯酶等,其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还原反应,在呈色后须立刻测定,否则空气中的氧化作用使颜色加深,无法准确地定量。

  辣根过氧化物酶(HRP)是一种糖蛋白,每个分子含有一个氯化血红素(protonhemin)区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm,HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm,所以酶的浓度和纯度计算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)=25,式中1%指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g,即10mg/ml,所以,酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP纯度(RZ)=A403nm/A275nm纯度RZ(Reinheit Zahl)值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右,最高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。

  ELISA的基本原理有三条:

  (1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;

  (2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;

  (3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。

  ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:

  1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。

  2、研究抗酶抗体的合成。

  3、显现微量的免疫沉淀反应。

  4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

  基本方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

  1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。

  2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

  3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。

  4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。

  5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

  基本方法二 用于检测未知抗体的间接法:

  用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。 ↓

  加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照) ↓

  于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。 ↓

  其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

  (二) 酶与底物

  酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的'产物。是ELISA成败的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物放大作用,但不同的酶选用不同的底物。

  免疫技术常用的酶及其底物

  * 终止剂为2mol/L H2SO4

  ** 终止剂为2 mol/L柠檬酸, 不同的底物有不同的终止剂。

  可催化下列反应: HRP+H2O2→复合物 复合物+AH2→过氧化物酶+H2O+A AH2 ——为无色底物, 供氢体; A—— 为有色产物。

  (三) ELISA常用的四种方法

  1.直接法测定抗原 将抗原吸附在载体表面;

  加酶标抗体,形成抗原—抗体复合物; 加底物。底物的降解量=抗原量。

  2.间接法测定抗体

  将抗原吸附于固相载体表面; 加抗体, 形成抗原-抗体复合物; 加酶标抗体;

  加底物。 测定底物的降解量=抗体量。

  3.双抗体夹心法测定抗原

  将抗原免疫第一种动物获得的抗体吸附于固相表面;加抗原,形成抗原-抗体复合物;

  加抗原免疫第二种动物获得的抗体,形成抗体抗原抗体复合物;加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体); 加底物。底物的降解量=抗原量。

  4. 竞争法测定抗原

  将抗体吸附在固相载体表面;

  (1) 加入酶标抗原;

  (2),(3)加入酶标抗原和待测抗原;

  加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。

  elisa测抗原实验报告 7

  入校新生;谷丙转氨酶(GPT);乙肝表面抗原(HBsAg)

  肝功能检查是诊断肝炎的主要指标,国内献血员筛选仍以乙肝表面抗原(HBsAg)的检测为依据[1]。HBsAg是HBV感染的特异性指标。大学生多集体生活,易造成肝炎的流行。每年对入校新生的肝功能检查和HBsAg的检测是很必要的,为此,我们对入校新生集体组织抽血检查,现将2003年、2004年入校新生检测结果报告如下。

  1一般资料

  11对象

  研究对象是2003年全部入校新生3698人,其中男生1420人,女生2278人。2004年全部入校新生4377人,男生1805人,女生2572人。年龄18~22岁,所有的标本为空腹静脉血,并于24h内分离血清。

  12仪器与方法

  用反向被动血凝试验测定HBsAg,谷丙转氨酶(GPT)用赖氏法测定[2]。使用上海荣盛生物技术公司生产的谷丙转氨酶试剂盒,用厦门分析仪器厂生产的721分光光度计比色,通过标准曲线计算出谷丙转氨酶的单位。

  2结果

  检测结果见表1,表2。由表1,表2可以看出,我校2003年入校新生中HBsAg携带者31人,其携带率为084%(31/3698),其中女生13人,携带率057%(13/2278),男生18人,携带率127%(18/1420);GPT>80U/L3人,异常率为008%由表1,表2还可看出无论是2003年新生还是2004年新生,男生HBsAg携带率远远高于女生。表12003年入校新生HBsAg携带率及GPT异常率的检测结果(略)表22004年入校新生HBsAg携带率及GPT异常率的检测结果(略)

  3讨论

  资料显示,我校新生HBsAg携带率2003年为084%,2004年为067%,远远低于我省HBsAg携带率(我省HBsAg携带率一般在7%左右)。男生的HBsAg携带率高于女生的原因,我们认为可能与生活方式有关,如男生喜欢几个人聚在一起吃饭、喝酒,而女生却很少有这种爱好,所以肝炎在男生中传播的机率就大一点。虽然我校学生HBsAg携带率偏低,但是也不能忽视,我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染高发区,大约有98%的人携带乙肝病毒,每年有30万人死于与乙肝有关的肝癌及肝硬化。因此,对正常的学生做好乙肝疫苗的接种,杜绝乙肝的传播是很重要的。有报道820例幼儿接种乙肝疫苗后产生的免疫应答率为99268%,接种效果高于国内9677%的.报道[3]。对于HBsAg携带者和GPT增高者,做好早发现、早治疗。病毒性肝炎已成为威胁人们健康的严重疾病,做好乙肝疫苗的接种,对学生进行乙肝知识的培训,让他们了解乙肝的传播途径和预防措施,养成良好的生活习惯,加强自我保护意识。

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